Ⅰ 科研论文
一、2012～2018年发表的科研论文（7篇）
先感染外睾吸虫的钉螺其分泌物和血淋巴细胞对日本血吸虫幼虫的反应*
唐崇惕1 郭跃1 卢明科1 陈东2
摘要：目的单独感染外睾吸虫的湖北钉螺，螺体分泌物和血淋巴细胞剧烈增加；螺体表分泌物含大小不等颗粒及晶体状物，体内分泌物为金黄色或褐色小颗粒，各颗粒团附近均有极小细胞核。双重感染外睾吸虫和日本血吸虫的钉螺，体内外分泌物和血淋巴细胞等产物同样大量产生；体内分泌物颗粒及其附近小细胞核、3种血淋巴细胞及副腺细胞，出现在血吸虫幼虫周围并进入虫体内；所有血吸虫幼虫结构异常，停止发育并死亡。阴性钉螺和单独感染日本血吸虫的钉螺，它们体内外分泌物及血淋巴细胞的数量均少；分泌物颗粒和血淋巴细胞虽有在血吸虫幼虫附近，但都没有进入虫体内。
关键词：日本血吸虫；外睾吸虫；湖北钉螺；分泌物；血淋巴细胞
中图分类号：R383.3 文献标识码：A
Reaclions of snail secretions and lymphocytes to Schistosoma japonicum larvae in Oncomelania hupensis pre- infected with Exorchis trematode
TANG Chong-ti，GUO Yue，LU Ming-ke，CHEN Dong
（1. Parasitology Research Laboratory ， Xiamen University，Xiamen 361005， China ；
2. Synthetic Bio-manufacturing Center， Utah State University，Logan ， Utah 84341， USA）
ABSTRACT：The objective was to understand the reactions of snail secretions and lymphocytes to the larval Schistosoma japonicum in Oncomelania hupensis snails pr-infected with Exorchis sp. and they were compared with the conditions of negative O. hupensis snails， snails singly infected with Exorchis， and singly infected with S. japonicum. In the snails at 12-105 d after infection with Exorchis， snail secretions and lymphocytes increased much. Those situations were also found in the O. hupensis snails dual infected with Exorchis and S. japonicum. Thick secretion with granular and crystal structure on snail body surface and in snail inner tissue were much small secretive granules with some small cell nuclei， lymphocyte with spherical nuclei of 3 varying sizes and accessory gland cells，some of which were found in the bodies of all abnormal S. japonicum larvae. In the negative O. hupensis and snails singly infected by S. japonicum the secretions and lymphocytes were very few. Neither secretive granule nor lymphocytes was found m any bodies of S. Japonicum larvae m a hupensis smgly mfected by S Ja-ponicum.
KEY WORDS： larval Schistosoma japonicum ； Exorchis trematode；Oncomelania hupensis ； secretions ；lymphocytes
外睾吸虫（Exorchis spp.）阳性螺有血淋巴细胞及特殊分泌物大量增生的现象，经外睾吸虫幼虫先感染的湖北钉螺（Oncomelania hupensis）能击毙再进人其体内全部日本血吸虫（Schistosoma japonicum）早期母胞蝴（1-5、16）。近年，国外许多学者报道曼氏血吸虫（S. mansoni）幼虫与其中间宿主双脐螺（Biomphalaria glabrata）复杂的相互作用，涉及螺类宿主血淋巴细胞的生理生化、蛋白酶、免疫应答通路以及基因等诸多情况（6-15、17）。我们在外睾吸虫和日本血吸虫双重感染的钉螺体中，观察到螺体内血淋巴细胞、分泌颗粒与其附近小细胞核及副腺细胞存在于异常血吸虫幼虫体内，而在单独感染血吸虫的钉螺体中无此情况。估计钉螺体内的血淋巴细胞及分泌物中某些物质对人侵的血吸虫幼虫有重要防御作用。为了要对它们深人研究，我们先对不同条件的钉螺其体内外分泌物和血淋巴细胞种类，及它们对血吸虫幼虫反应情况，进行了观察。结果介绍如下。
1 材料与方法
人工感染日本血吸虫的阳性小白鼠和从湖南汉寿西洞庭湖岸边采集的一批湖北钉螺都在实验室内饲养备用。用从实验小白鼠肝脏取得日本血吸虫虫卵孵化毛蚴，每粒钉螺与40个毛蚴接触，钉螺在感染后5～52 d间分别用10%福尔马林溶液固定保存；从湖南汉寿西洞庭湖捕捉的鲶鱼肠管收集外睾吸虫，取其虫卵和少量面粉相拌饲食感染钉螺，感染后16～19 d分别用10%福尔马林溶液固定保存；感染了外睾吸虫的另一些钉螺，分别在感染后21 d将它们再重复感染日本血吸虫，每粒外睾吸虫阳性钉螺接触日本血吸虫毛蚴数分别为20～90条，在感染血吸虫毛蚴后4～82 d间不同时间用10%福尔马林溶液固定保存。上述3组实验钉螺和一些天然阴性钉螺，全部经石蜡连续切片染色制片，显微镜油镜检查各切片的所有断面，比较观察各组钉螺体内外分泌物结构和血淋巴细胞种类及其出现情况，以及它们与螺体内日本血吸虫幼虫接触情况；显微照相储存于电脑。实验钉螺经连续切片观察均无其它吸虫幼虫天然感染。
2 结果
在外睾吸虫阳性钉螺的循环系统和螺体组织中观察到细胞核大小不同3种血淋巴细胞，细胞核均是圆球状，具中等大细胞核的血淋巴细胞数目*多。大、中、小3种血淋巴细胞核的直径分别为：8.7μm、5.2～5.9 μm、4.2～4.7 μm。在螺体组织切片中，见到体表外有粘液状分泌物，体内有金黄色微小颗粒状分泌物，各颗粒团都伴有一个坚实圆形深色极小细胞核（直径1.9～2.6 μm）（图8、9、11）。在螺体内脏团上端侧方的副腺（Accessory gland）部位，有许多大小不同副腺细胞，细胞核直径6.6～10.6Mm。这些细胞和分泌物颗粒可通过循环管道被输送到身体各处。但是钉螺体内外分泌物结构、血淋巴细胞及副腺细胞的数目，在不同条件的实验钉螺体上表现的情况有所不同。
2.1 阴性钉螺分泌物和血淋巴细胞的表现情况 在没有任何吸虫幼虫寄生的阴性正常钉螺，它们体表的分泌物稀薄，全部为黏液状结构，稍厚部位如重叠的云层（图1）。在螺体头足靠边缘部位的组织中，散布若干淡黄色小颗粒状分泌物，颗粒大小和形状不规则，各颗粒团边沿见有一粒深色极小的细胞核（图2）。在螺体内脏团各部位中的循环系统管道非常微细，均不易查见。在消化腺部位组织中只见到数目极少的中等大血淋巴细胞和小血淋巴细胞（图3）。在生殖腺部位的组织中，血淋巴细胞数稍多一些，可见大、中、小3种血淋巴细胞核（图4）。
2.2 单独感染日本血吸虫的钉螺其分泌物和血淋巴细胞的表现情况 单独感染日本血吸虫的钉螺，其体外稀薄黏液状分泌物、体内为数不多血淋巴细胞和颗粒状分泌物等情况，均和阴性钉螺无大差别（图5-8）。感染后5～8 d的钉螺（5-6图），在血吸虫早期幼虫附近的螺组织中，有少量金黄色小颗粒状分泌物；感染后10～52 d的钉螺（图7-8），在血吸虫母胞蚴附近螺组织中，有一些血淋巴细胞及较多颗粒分泌物，在有的胞蚴体壁上有许多细小黑色颗粒（图7），它们都没有进人胞蝴体内（图7-8）。血吸虫幼虫的发育没有受到影响。
2.3 单独感染外睾吸虫的钉螺其分泌物和血淋巴细胞的表现情况 单独感染外睾吸虫的钉螺已实验确认，96%（157/163）都有体表分泌物和血淋巴细胞增加现象（图9-12）。在感染后16～19 d的钉螺体组织中很容易找到3种血淋巴细胞，中大血淋巴细胞的数量较多；螺体组织中着许多金黄色细小颗粒状分泌物，它们散布无论稀疏或浓密都伴随有尚未知晓的极小细胞核（图9、11）。螺体整个体表分泌物增厚，在分泌物黏液膜上密布着大小及形状不同的各种颗粒，并有许多晶体结构的物质（图10）。在螺体内脏团的消化腺区域，循环系统所有血淋巴管都明显扩大。管内含有各种血淋巴细胞、螺体分泌物小颗粒及与其在一起的小细胞核（图11），副腺细胞在管内亦清晰可见（图12）。
2.4 外睾吸虫和日本血吸虫双重感染的钉螺其分泌物和血淋巴细胞表现情况 外睾吸虫和日本血吸虫两者间隔21 d先后感染的钉螺，后感染的血吸虫虫体刚进人螺体，立即出现异常。虫体附近出现许多含极小细胞核的分泌物小颗粒、各种血淋巴细胞和副腺细胞，并进人4 d的异常虫体体内（图13-14）。异常虫体内常有1～3个未知的大红色球团（图13），它们表面密布暗淡小颗粒。这红团块可持续存在数十天。血吸虫感染后16～21 d（图15-16）和38～39 d（图17-18）的钉螺组织中许多含极小细胞核的小颗粒分泌物、各种血淋巴细胞和副腺细胞，亦见于所有异常血吸虫附近及其体内。感染后82 d （图19-20）的异常血吸虫幼虫在螺体不同部位，虫体生长情况不同，但螺体的反应和后果是相同的。如在螺体围心腔附近的一个大的异常母胞蝴（图19），螺体各种血淋巴细胞和含极小细胞核的咖啡色颗粒分泌物等大量包围并侵人虫体，它中间的一团已近解体；在螺体外套膜上的小异常母胞蝴（图20），螺组织中血淋巴细胞和含极小细胞核的金黄色
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